产品货号:
KM0161
中文名称:
5-溴脱氧尿苷(BrdU)
英文名称:
5-bromo-2'-deoxyuridine
产品规格:
100mg|1g
发货周期:
1~3天
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BrdU是一种合成的胸苷溴化类似物,在S期可替代胸苷选择性插入细胞DNA。BrdU通常和广泛用于测定DNA合成和标记分裂细胞,最后用来研究诱导细胞增殖的信号通路和其他生理过程。BrdU通过体外细胞培养或体内注射的方式进行探针加载,然后用抗BrdU的抗体进行特异性检测。
BrdU标记后,对组织或细胞进行固定和透化后,需要额外的DNA水解步骤(有时也称DNA变性),从而允许抗BrdU的抗体能够与插入DNA的BrdU结合。BrdU抗体能够与其他细胞标记物如Ki67,双皮质素(DCX)和NeuN联合使用来鉴定增殖细胞和新分化神经元。

英文全称 | 5-bromo-2'-deoxyuridine |
中文全称 | 5-溴-2'-脱氧尿苷 |
CAS号 | 59-14-3 |
分子式 | C9H11BrN2O |
分子量 | 307.10g/mol |
纯度 | ≥99%(HPLC) |
外观 | 白色至类白色粉末 |
溶解性 | 溶于DMSO(20mg/mL),无水乙醇(~25mg/mL),水(10mg/mL) |

组分 | 100mg | 1g |
5-溴脱氧尿苷(BrdU) | 100mg | 1g |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:-20℃,干燥,有效期2年。

- BrdU是一种诱变剂,操作过程一定要注意防护,不要与皮肤直接接触。另戴口罩避免粉尘吸入。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

- BrdU标记:体外标记细胞
- 制备BrdU储存液(10mM):称取3mg BrdU(Mw:307.10)溶于1mL去离子水,充分溶解即可。
- 用细胞培养基按照1:1000的比例将储存液稀释到10μM BrdU染色液,并在无菌条件下用0.2μm滤膜对染色液进行过滤除菌。
- 吸掉细胞内培养基并更换无菌的10μMBrdU染色液,置于CO2培养箱37℃孵育1-24h。
- BrdU孵育时间取决于细胞分裂速度。原代细胞可能要高达24h,但快速增值细胞系可能仅需1h。达到最佳信噪比的时间需要通过优化条件来确定。
- 吸掉细胞内染色液,用PBS清洗2次,每次至少5s。
- 根据标准免疫细胞化学(ICC)操作流程进行细胞固定和透化。但是在开始免疫染色前需参照下述的DNA水解步骤。
- 制备BrdU储存液(10mM):称取3mg BrdU(Mw:307.10)溶于1mL去离子水,充分溶解即可。
- BrdU标记:BrdU体内标记
- BrdU体内标记方法比较多,常见的有腹腔注射法(Intraperitoneal injection)和口服法。以下为腹腔注射法的步骤,其他方法可参考文献或根据实验室固有经验操作。
- 用1×PBS溶解适量的BrdU配制成10mg/mL储存液,过滤除菌,按照单次用量分装冻存后待用,避免反复冻融。
- 对于小鼠,通用情况注射浓度为100mg/kg。
- BrdU标记完成后,根据实验室已成的步骤处理动物。
- BrdU插入快速分化组织比如小肠,在注射后30min就能检测到。但大多数组织可能需要高达24h才能检测到。合适的处理时间和注射剂量需要根据组织类型来优化。
- DNA水解(DNA变性步骤)
- 细胞样本
- 用1~2.5M HCl室温孵育细胞10min~1h,实际的HCl浓度和孵育时间根据实验来优化。如果使用更短的孵育时间,37℃孵育可能比室温孵育效果更好
- 可选步骤:去除HCl,用0.1M硼酸钠缓冲液,pH8.5室温中和30min。
- 1M硼酸钠缓冲液(pH8.5)配制方法:称取3.8g硼酸钠(Mw=381.4)加入100mL蒸馏水,充分溶解后,用NaOH调整到所需pH。
- 用PBS清洗3次,每次不少于5s。
- 根据标准ICC操作流程继续后续染色。
- 用1~2.5M HCl室温孵育细胞10min~1h,实际的HCl浓度和孵育时间根据实验来优化。如果使用更短的孵育时间,37℃孵育可能比室温孵育效果更好
- 组织切片
- 对于石蜡切片必须先做脱蜡处理再进行DNA水解步骤。
- 用1~2M HCl室温孵育切片30min-1h,实际的HCl浓度和孵育时间根据实验来优化。如果使用更短的孵育时间,37℃孵育可能比室温孵育效果更好。
- 可选步骤:去除HCl,用0.1M硼酸钠缓冲液(pH8.5)室温中和切片10min。
- 0.1M硼酸钠缓冲液(pH8.5)配制方法:称取3.8g硼酸钠(Mw=381.4)加入100mL蒸馏水,充分溶解后,用NaOH调整到所需pH。
- 用PBS清洗3次,每次不少于5s。
- 根据标准IHC操作流程继续免疫染色步骤。
- 细胞样本
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